離心式快速脫鹽柱(5 kD)

● 產(chǎn)品介紹

離心式快速脫鹽柱根據排阻層析原理可以出色地完成蛋白脫鹽或緩沖液置換，適用于高于5 kD蛋白樣品的脫鹽、緩沖液置換或小分子去除。該產(chǎn)品回收率高，幾乎等體積回收蛋白樣品，在脫鹽的同時(shí)保持高回收率，樣品不會(huì )被稀釋。簡(jiǎn)單使用離心操作，無(wú)需裝柱，代替比較耗時(shí)的傳統透析處理，以達到快速蛋白樣品脫鹽純化以及替換蛋白質(zhì)緩沖液的目的。

脫鹽柱參數如下：

● 貯存、運輸和效期：

常溫貯存（不能冷凍）；常溫運輸；有效期兩年。

● 注意事項：

1. 操作方便，免去了繁瑣的透析過(guò)程，15-20分鐘內即可完成樣品處理。

2. 本脫鹽柱建議一次性使用，不建議重復使用。

● 操作步驟

1. 取脫鹽柱，放入2 ml收集管中。  

2. 加入400 μl滅菌水或樣品所需的緩沖液，常溫靜置5 min，1000×g（約3000 rpm）離心2 min。

注：離心力不要高于1000 g，過(guò)高的離心力會(huì )損傷填料，降低脫鹽效率。

3. 重復步驟2操作2次。

4. 樣品準備：

樣品在上樣前建議離心取上清或用0.22 μm或0.45 μm濾膜過(guò)濾，減少雜質(zhì)影響。

5. 脫鹽處理：

脫鹽柱轉移到新的1.5 ml離心管中，脫鹽柱中加入100-200 μl需要處理的蛋白樣品，靜置30秒，1000×g（約3000 rpm）離心2 min，收集回收樣品，保存備用。

注：為了確保從小體積樣品中獲得最大的蛋白回收效率，低于100 μl樣品上樣后要在樣品完全吸收后向填料中加入適當體積的超純水或緩沖液壓層，使得總上樣體積為100 μl。

● 注意事項

1. 回收效果：樣品脫鹽后的回收率與樣品的濃度，以及上樣體積相關(guān)。樣品濃度越高，其回收率越高；同時(shí)在推薦的樣品上樣量范圍內，上樣量越大，其回收率也會(huì )隨之升高。通常脫鹽后蛋白的回收率在70-90%。

2. 樣品處理體積要在柱子處理范圍內，該脫鹽柱最多處理體積是200 μl樣品，過(guò)多會(huì )導致收集 

管中液體浸沒(méi)到脫鹽柱。

3. 填料在高濃度醇溶液或飽和鹽溶液中會(huì )有失水收縮現象，請勿將上述溶液進(jìn)行過(guò)柱；

4. 加樣時(shí)盡量均勻加至管中心位置；

5. 當樣品濃度過(guò)低時(shí)（<0.01 mg/ml)，需先將樣品濃縮到所需體積或所需濃度。

● 常見(jiàn)問(wèn)題

 實(shí)驗示例：

          離心式快速脫鹽柱脫鹽處理樣品
樣品1（lane1-5）：細菌裂解物（正常鹽濃度）
lane1，2，3：細菌裂解物上樣5μl，4μl，3μl；
lane4，5：100μl細菌裂解物經(jīng)過(guò)脫鹽柱處理后，上樣5μl
lane 4：S公司脫鹽柱；lane 5：Real-Times脫鹽柱
結論：脫鹽柱對裂解物所有蛋白都有較好的回收率（80%）

樣品2（lane 6-8）：BSA溶液
lane 6: BSA水溶液（0.4μg/μl）上樣量5μl（2μg）
lane 7：BSA 0.5M NaCl溶液（0.4μg/μl）上樣量5μl（2μg） 
lane 8：BSA 0.5M NaCl溶液脫鹽柱處理上樣量5μl
結論：脫鹽柱脫鹽處理效果明顯（含鹽BSA電泳泳道明顯變寬）
           脫鹽后的BSA回收率可達90%

脫鹽程序：脫鹽柱中加入400μl超純水，常溫靜置5min，1000 g
離心3min，重復2次；脫鹽柱放入新的1.5ml離心管中，加入0.1ml
細菌裂解物或0.2ml BSA溶液，靜置30S，1000g離心3min。

電泳：4-18% RealPAGE預制膠，1×TGS，200V 37-13mA 53min，
FastBlue蛋白染色液染色30分鐘。