半干轉轉印對濾紙要求較高，要用超厚濾紙，如伯樂(lè )厚度2.4mm濾紙（伯樂(lè )貨號：1703965）?；蛘哌x擇半干轉轉印濾布（貨號：SP1010）
5×RealBlot快速半干轉轉膜緩沖液
5×RealBlot Rapid Semi-Dry Transfer buffer Ver740158
● 產(chǎn)品組成：
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貨號
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名稱(chēng)
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規格
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RT5030
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5×RealBlot快速半干轉轉膜緩沖液
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500 ml
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說(shuō)明書(shū)
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一份
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● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
5×RealBlot快速半干轉轉膜緩沖液使用獨特配方，使用半干轉法（Semi-dry blot）方法，能在10-15分鐘內高效快速地將蛋白轉移到印跡膜（PVDF膜或NC膜）上。
特點(diǎn)：
環(huán)境友好：快速轉膜液不使用甲醇，減輕了對實(shí)驗者和環(huán)境的傷害。
兼容性好：快速轉膜液能兼容Laemmli膠，預制膠，Bis-Tris膠等多種凝膠。
節省時(shí)間：快速轉膜液能在10-15分鐘內完成蛋白的轉印。
以每次轉印使用100 ml 1×RealBlot快速半干轉轉膜緩沖液計算，該產(chǎn)品可以使用25次。
● 貯存及運輸：
4-8℃貯存；有效期一年；常溫運輸。
● 使用說(shuō)明：
轉膜前的準備：
2張半干轉專(zhuān)用超厚濾紙（厚度2.4 mm）或者半干轉轉印濾布（貨號：SP1010）；裁好的轉印膜；足夠的1×RealBlot快速半干轉轉膜緩沖液；無(wú)水甲醇（處理PVDF膜用）
1 按照下表配制1×RealBlot快速半干轉轉膜緩沖液：
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加入順序
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1×快速轉膜液配制量 200ml
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1
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5×快速轉膜液
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40 ml
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2
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超純水
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120 ml
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3
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無(wú)水乙醇
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40 ml
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注：按照順序加入各種溶液。如果加入轉膜液后沒(méi)有用水沖洗稱(chēng)量容器，加入乙醇會(huì )產(chǎn)生沉淀。
2 將濾紙或濾布浸泡在1×快速轉膜液中，完全浸濕3-5分鐘。
3 PVDF膜使用前要用無(wú)水甲醇潤濕30秒，浸泡在1×快速轉膜液中，平衡5分鐘。NC膜無(wú)需處理，直接浸泡在轉膜緩沖液中。
4 將凝膠在超純水中浸泡漂洗2分鐘，去除膠表面的SDS。
1 負極（陰極）
2一張超厚濾紙或四層濾布
3 凝膠
4 轉印膜
5一張超厚濾紙或四層濾布
6 正極（陽(yáng)極）
6 用滾輪趕出氣泡。
7 半干轉推薦使用恒流轉移：
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分子量范圍和凝膠厚度
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一塊小型膠（7.3×8.5 cm）
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兩塊小型膠（7.3×8.5 cm）
或一塊中型膠（8.5×13.5 cm）
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1.5 mm厚度凝膠
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下列條件基礎上增加2分鐘
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下列條件基礎上增加2分鐘
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高分子量
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大于130 kD
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恒流1.3 A，15分鐘
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恒流2.5 A，15分鐘
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混合分子量
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5-130 kD
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恒流1.3 A，10分鐘
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恒流2.5 A，10分鐘
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低分子量
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小于30 kD
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恒流1.3 A，7分鐘
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恒流2.5 A，7分鐘
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注：不同廠(chǎng)家半干轉儀器設置可能有所不同，請根據廠(chǎng)家說(shuō)明書(shū)適當調整。
電泳：4-18%預制膠
電泳：1×TGS 200V 57-23mA 50min
濾紙：2.4mm厚濾紙（Bio-Rad 1703965）
轉印膜：0.22 NC膜（Cat：ML-NC-152022-5）
儀器：Turbo半干轉機器 恒流1.3A 10min
染色：膜麗春紅染色
