8-18% RealPAGE Tricine預制膠（通用型 U型玻璃板）
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貨號
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名稱(chēng)
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規格
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RTD6115-0818
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8-18% RealPAGE Tricine預制膠 通用型 U型玻璃板
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10板/盒
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● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
RealPAGE Tricine預制膠可以用來(lái)檢測2.5-40 kD的多肽大小。預制膠玻璃板尺寸10×8.2 cm，凝膠尺寸8.3×7.5 cm，凝膠厚度1.1
mm，梳子12齒，最大上樣體積30 μl，兼容伯樂(lè )電泳槽。
● 貯存、運輸和效期：
4-8度貯存（切勿冷凍）；常溫運輸；有效期1個(gè)月。
● 使用說(shuō)明：
一. 電泳緩沖液配制：
10×Tris-Tricine-SDS緩沖液配制：
將10×Tris-Tricine-SDS緩沖液（10×TTS）粉末（Cat No：CB010P）置于一干凈的一升燒杯中，加入500ml超純水，徹底攪拌混勻，不要調節pH，即配成500 ml 10×TTS緩沖液。
1×TTS緩沖液配制
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1×TTS配制量 500 ml
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1×TTS配制量 1000 ml
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10×TTS
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50
ml
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100
ml
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超純水
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450
ml
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900
ml
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注：伯樂(lè )Mini
III電泳槽一次電泳使用500 ml 1×TTS緩沖液。
二. 樣品處理：
待上樣的檢測樣品與2×Tricine多肽上樣緩沖液[Cat：TP050]等體積混合，95℃處理5分鐘后上樣。蛋白Marker一般已經(jīng)含有上樣緩沖液，根據說(shuō)明書(shū)上樣（預染Marker不能加熱處理，非預染Marker上樣前一般要95℃處理5分鐘）。
三. 電泳：
3.1 拆開(kāi)預制膠包裝，將預制膠安裝在合適的電泳槽中。
注：伯樂(lè )Mini III或Mini-PROTEAN
Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列電泳槽請確保密封條的安裝方向（左圖）。六一其他系列，君意東方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等電泳槽可以直接使用預制膠。不兼容Thermol系列電泳槽。
3.2 將電泳槽的內槽加滿(mǎn)1×TTS緩沖液，輕柔拔出梳子，用1ml移液器將梳孔吹洗干凈，將Marker或蛋白樣品（已經(jīng)過(guò)處理）加入點(diǎn)樣孔，穩壓電泳（表1），至藍色指示前沿至分離膠下沿位置時(shí)即可停止電泳。整個(gè)電泳過(guò)程大約需要2.5-3個(gè)小時(shí)。
表1 多肽電泳條件
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恒電壓
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120V
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起始電流
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80-85
mA/板膠
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結束電流
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25-35
mA/板膠
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電泳時(shí)間
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~70min
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四.染色：（使用FastBlue蛋白染色液 Cat:RTD6202）
4. 1 將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器中，加入適量染色液（以剛剛覆蓋過(guò)膠面為適），蛋白條帶含量高于1μg的，染色1-2分鐘即可見(jiàn)。
4.2
搖床上常溫搖動(dòng)10-15分鐘，至條帶清晰可見(jiàn)滿(mǎn)足實(shí)驗要求后停止染色。
4.3 蒸餾水漂洗凝膠，在蒸餾水中脫色搖動(dòng)10-15分鐘，至凝膠基本無(wú)藍色背景，拍照記錄結果。
五. 轉膜：
多肽轉膜選擇孔徑0.22 μm PVDF膜（用前用甲醇處理潤濕）或0.22 μm NC膜。
5.1 半干轉：
使用伯樂(lè )Trans-Blot Turbo半干轉機器請選擇配套的5×RealBlot快速半干轉轉膜緩沖液（貨號：RT5030）。轉膜推薦條件：一板小型凝膠（8×10 cm）恒流，1.3 A，7-10
min。
5.2 濕轉：
濕轉轉膜緩沖液：25 mM
Tris,192 mM Glycine, 20% Methanol,pH~8.3；
轉膜條件：恒流200-300
mA 40-60 min