TMB顯色液(沉淀型，組化或膜HRP顯色用)

TMB Color Development Solution for IHC or Blotting

●       產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

TMB，即 3, 3′,5 ,5′-Tetramethylbenzidine，是辣根過(guò)氧化物酶（HRP）的常用底物。在辣根過(guò)氧化物酶或其他適當過(guò)氧化物酶的催化下，TMB 會(huì )產(chǎn)生藍色產(chǎn)物。TMB 顯色液（沉淀型，組化或膜HRP顯色用，TMB Color Development Solution for IHC or Blotting）采用最新的單一溶液的 TMB 顯色技術(shù)，用于 Western 或免疫組化等 HRP的顯色檢測，簡(jiǎn)化了操作步驟，并且使檢測結果更加穩定可靠。本顯色液具有高靈敏性，與 HRP反應后產(chǎn)生藍紫色沉淀，沉淀吸附于印跡膜上，不會(huì )脫落，方便顯色結果的保存和觀(guān)察。

? 本試劑盒主要適用于免疫組化或原位雜交時(shí)HRP的顯色檢測，以及Western、Southern、Northern等HRP的膜顯色檢測；本顯色液也可以用于原位檢測細胞或組織內源性的過(guò)氧化物酶。由于產(chǎn)生的是沉淀型藍色產(chǎn)物，不適用于ELISA檢測。

? 用于免疫組化檢測時(shí)，如果每個(gè)樣品的顯色液用量為0.1ml，則可以檢測1000個(gè)樣品；對于膜的顯色檢測，如果每次使用2.5 ml顯色液，則可以檢測40次。

● 保存條件：

2-8℃避光保存；一年有效。

● 使用說(shuō)明：

? 如果發(fā)現TMB顯色液出現混濁或顏色變成藍色，應該停止使用。

一. 免疫組化檢測：

1. 參考免疫組化的實(shí)驗步驟，在與辣根過(guò)氧化物酶標記的抗體孵育后，用適當洗滌液洗滌3-5次，每次3-5分鐘。

2. 洗滌完畢后，去除洗滌液，滴加約100微升TMB顯色液。

3. 室溫避光孵育3-30分鐘或更長(cháng)時(shí)間(可在濕盒中顯色過(guò)夜)，直至顯色至預期深淺。

4. 去除染色液，加入重蒸水孵育10分鐘以終止反應。

5. 拍照記錄或適當封片后拍照記錄。如果有必要，可以使用中性紅染色液進(jìn)行復染后再進(jìn)行拍照記錄或適當封片后拍照記錄。

二. 膜的HRP顯色檢測：

1. 參考相應的實(shí)驗步驟，在與辣根過(guò)氧化物酶標記的抗體孵育后，用適當洗滌液洗滌3-5次，每次5分鐘左右。

2. 洗滌完畢后，去除洗滌液，

3. 滴加約適量TMB顯色液充分覆蓋膜。

4. 室溫避光孵育3-30分鐘或更長(cháng)時(shí)間(可長(cháng)達數小時(shí))，直至顯色至預期深淺。

5. 直接拍照記錄。

● 常見(jiàn)問(wèn)題：

一. 背景顯色太深。

1. 如果背景顯色太深，一方面需考慮使用適當的封閉液進(jìn)行封閉，例如選購適當的封閉液或使用和一抗相同來(lái)源的血清(10%)進(jìn)行封閉。另一方面，請選購經(jīng)過(guò)適當吸附的二抗，以減小二抗的非特異性吸附。

2. 可以考慮縮短顯色時(shí)間，或降低二抗濃度。另外，選擇適當強度的洗滌液，或延長(cháng)洗滌時(shí)間也會(huì )有所幫助。

二. 沒(méi)有顯色或顯色太弱。

 1. 適當提高一抗或二抗的濃度。在離心管內用稀釋的二抗與染色液反應，檢測二抗是否可以被正常顯色。 

2. 可以考慮使用更加靈敏的放大檢測體系，例如使用生物素檢測體系。

3. 可以適當延長(cháng)顯色時(shí)間。

4. 如果上述改進(jìn)不能獲得預期效果，對于免疫組化或Western，可以考慮更換效果更好的一抗；對于Southern、Northern或原位雜交，則可以考慮更換探針。

實(shí)驗示例：

樣品：K562細胞,SDS裂解液(Cat:RL1060)提取總蛋白；
電泳：4-20%RealPAGE Tris-Glycine預制膠(Cat:RTD6117-0420)
轉膜：RealBlot快速轉膜液(Cat:RT5020),0.45μmPVDF膜，400 mA 30 min
封閉：Western封閉液I（BSA）（Cat：WB1070）常溫封閉60min
一抗：Anti-PCNA抗體（鼠單抗）（Cat：APM5012） 1:5000  RT 60min；
二抗：HRP標記羊抗鼠IgG（Cat：HGM1060） 1:5000  RT 60min；
顯色：TMB顯色液(沉淀型，組化或膜HRP顯色用)（Cat：TM1026），顯色1分鐘

使用TMB顯色液發(fā)表部分文章列表：

1. [2022 IF=9.22] A HCR based multivalent aptamer amplifier for ultrasensitive detection of Salmonella.

Author: Mengni Sun, Na Ma, Hanxing Shi, Ling-Zhi Cheong, Wenge Yang, Zhaohui Qiao

Product: TM1026 TMB顯色液(沉淀型，組化或膜HRP顯色用)

Journal: Sensors and Actuators:B.Chemical  2023,375,132860

Institution：College of Food and Pharmaceutical Sciences, Ningbo University

Paper link：https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0925400522015039