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GoldView核酸染色劑
● 產(chǎn)品介紹:
GoldView 是一種可代替溴化乙錠(EB)的新型DNA染料,其靈敏度與EB相當,使用方法與之完全相同。在紫外燈下雙鏈DNA呈現綠色熒光。通過(guò)小鼠皮下注射實(shí)驗,尚未發(fā)現GoldView有致癌作用。
● 貯存、運輸和效期:
常溫貯存;常溫運輸;有效期兩年。
● 實(shí)驗操作步驟:
1. 瓊脂糖電泳凝膠的制備及染色(預染法):
1. 按照所需濃度稱(chēng)取瓊脂糖,加入TAE或TBE緩沖液,在微波爐中加熱至徹底溶解。
2. 等凝膠溫度降至大約50-60℃以下時(shí),按照稀釋10000倍加入Goldview溶液,如100 ml凝膠加入10 μl;徹底搖勻后鋪膠并插入梳子。
3. 凝固后,將梳子輕輕拔出。
4. 上樣電泳,電泳結束后紫外觀(guān)察。
注:預染法,Goldview染色會(huì )出現陰陽(yáng)膠現象,即隨著(zhù)電泳時(shí)間延長(cháng),較小的片段會(huì )染色不清楚,(參見(jiàn)實(shí)驗示例),此時(shí)可以將凝膠用后染法染色即可看到小片段條帶。
2. 瓊脂糖電泳凝膠的制備及染色(后染法):
1. 按照所需濃度稱(chēng)取瓊脂糖,加入TAE或TBE緩沖液,在微波爐中加熱至徹底溶解。
2. 等凝膠溫度降至大約50-60℃以下時(shí),不要加入Goldview溶液,直接鋪膠并插入梳子。
3. 凝固后,將梳子輕輕拔出。
4. 上樣電泳。
5. 電泳結束后將凝膠浸泡在含有Goldview溶液的TAE或TBE染色液中(染色液配制:100 ml 緩沖液中加入100-200 μl Goldview溶液,混勻)染色15-20分鐘;TAE或TBE緩沖液中脫色10-15分鐘。
6. 紫外觀(guān)察結果。
● 注意事項:
1. 膠厚度不要超過(guò)0.5cm,膠太厚會(huì )影響檢測的靈敏度。
2. GoldView在pH
3.6-7.0之間能更好地與核酸結合,因此電泳時(shí)最好使用新鮮的電泳緩沖液。
3. 由于GoldView染色后DNA產(chǎn)生綠色熒光,因此不適于用一般單色膠卷拍照,可以使用凝膠
成像系統保存圖象。
4. GoldView特別適合于大片段DNA的檢測(大于1kb的片段,檢測靈敏度與EB相當);當DNA
片段小于1kb時(shí),檢測靈敏度低于EB,特別是低于500bp的片段,GoldView可能亮度很弱
或檢測不到。
5. 雖然尚未發(fā)現GoldView有致癌作用,但由于GoldView溶液酸性較強,因此對皮膚、眼睛會(huì )
有一定的刺激,操作時(shí)應戴手套。
● 實(shí)驗示例:
引用GV001 Goldview核酸染色劑發(fā)表文章
1. [2016 IF=2.3] Isolation and
identification of bacteria from rhizosphere soil and their effect on plant
growth promotion and root-knot nematode disease.
Author: Dan Zhao, Hui Zhao, Di Zhao, Xiaofeng Zhu, Yuanyuan Wang,
Yuxi Duan, Yuanhu Xuan,Lijie Chen
Product:GV001 Goldview核酸染色劑
Journal: Biological Control 119,12-19,2018
Institution:Shenyang Agricultural University
Paper link: https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S1049964418300045