RealPAGE Native BN/CN 預制膠(U型板，通用型，12孔)

       RealPAGE Native BN/CN Precast Gels(U Type Plate,Universal,12 Wells)

● 貨品規格：

● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Blue/Clear Native PAGE（BN/CN-PAGE）是一種從生物樣品（質(zhì)膜，胞漿等）中分離分子量10 kD-10000 kD 范圍的蛋白質(zhì)復合物的電泳技術(shù)。其原理是用溫和去污劑(如 DDM，digitonin)將蛋白復合體從細胞膜中以近似天然的狀態(tài)分離出來(lái)，Blue Native PAGE （BN-PAGE）是用考馬斯亮藍 G-250 代替 SDS與蛋白結合而使其帶負電荷，根據蛋白分子量不同在 PAGE膠中得到分離；Clear Native PAGE（CN-PAGE）是電泳緩沖液中不加入任何染料，電泳中始終保持蛋白的天然電荷和活性狀態(tài)，然而，其蛋白的分辨率要低于Blue Native PAGE。另外，BN-PAGE由于考馬斯亮藍G-250存在，使蛋白都覆蓋上負電荷，可以分離堿性蛋白（pI＞7）；而CN-PAGE只適合于酸性蛋白（pI＜7）的分離。

本產(chǎn)品可以用于分離分子量在 10 kD-10000 kD 的蛋白復合體，樣品可以來(lái)于胞漿、細胞總裂解液、細胞膜、線(xiàn)粒體膜和葉綠體膜等。電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交、SDS-PAGE電泳、蛋白純化、蛋白活性檢測等分析實(shí)驗，也可直接用于電洗脫制備蛋白。

● 運輸和貯存：

本產(chǎn)品常溫運輸；凝膠4-8℃貯存，不要冷凍；有效期12個(gè)月。

● 使用說(shuō)明：

1. 樣品制備：

   該產(chǎn)品不含樣品制備的相關(guān)試劑，根據樣品種類(lèi)選擇不同提取方法。植物類(lèi)囊體BN樣品制備可以選擇植物類(lèi)囊體膜提取試劑盒（貨號:RTU5002）；動(dòng)物總蛋白BN樣品制備可以選擇

2. 電泳：

2.1 拆開(kāi)預制膠包裝，將預制膠安裝在合適的電泳槽中。

注：伯樂(lè )Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列電泳槽請確保密封條的安裝方向（下圖）。

六一其他系列，君意東方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等電泳槽可以直接使用預制膠。

不兼容Thermol系列電泳槽。

2.2 準備電泳緩沖液：

將10×BN/CN PAGE電泳緩沖液（干粉）溶于500 ml滅菌水中，徹底溶解，測定pH應為7.0左右，不要調節pH。用前稀釋10倍即配成1×BN/CN PAGE電泳緩沖液。

2.2.1 CN-PAGE電泳：

陽(yáng)極緩沖液和陰極緩沖液均直接使用1×BN/CN PAGE電泳緩沖液進(jìn)行電泳。

2.2.2 BN-PAGE電泳：

陽(yáng)極緩沖液使用1×BN/CN PAGE電泳緩沖液，陰極緩沖液按照下表配制：

2.3準備樣品：

2.3.1 CN-PAGE電泳：

2.3.2 BN-PAGE電泳：

2.3.2.1 植物類(lèi)囊體膜蛋白電泳：

*植物類(lèi)囊體膜蛋白電泳中，含去垢劑樣品中染料加入按照以下原則：

植物類(lèi)囊體樣品中G250終濃度為去垢劑終濃度的1/4。例如樣品中DDM（n-Dodecyl β-D-maltoside，β-DM， n-十二烷基-β-D-麥芽糖苷）終濃度為2%，則需要G-250終濃度為0.5%。10 μl蛋白樣品中需要加5% G-250染料1 μl。

2.3.2.2 動(dòng)物線(xiàn)粒體BN樣品電泳：

*動(dòng)物線(xiàn)粒體BN樣品電泳中，含去垢劑樣品中染料加入按照以下原則：

2.4電泳過(guò)程；

2.4.1 CN-PAGE電泳：

電泳內外槽均使用1×BN/CN PAGE電泳緩沖液。在電泳槽的內槽內加入1×BN/CN PAGE電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過(guò)加樣孔)，輕輕撥出預制膠梳子，用1ml吸頭沖洗加樣孔3次，隨后在電泳槽外槽加入適量的1×BN/CN PAGE電泳緩沖液。

2.4.2 BN-PAGE電泳：

BN-PAGE電泳外槽使用1×BN/CN電泳緩沖液；內槽開(kāi)始電泳使用的是1×藍色陰極緩沖液，冰浴電泳，等待電泳指示前沿到達凝膠1/3處時(shí)，將電泳緩沖液更換為1×BN/CN電泳緩沖液，繼續后續電泳，因為過(guò)多染料會(huì )影響蛋白在凝膠中的遷移以及蛋白后續的轉膜實(shí)驗。

BN-PAGE電泳條件（一板膠）

3. 轉膜：

BN-PAGE轉膜必須用PVDF膜，不能用NC膜，因為NC膜與G-250結合非常緊密，不易去除。轉膜后PVDF膜上的藍色染料可以用無(wú)水甲醇漂洗去除。轉膜緩沖液推薦使用10×BN轉膜緩沖液（貨號：BC600P）。

4. 染色：

4.1 將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器中，加入適量FastBlue蛋白染色液或常規考馬斯亮藍染色液（以剛剛覆蓋過(guò)膠面為適），條帶1-2分鐘即可見(jiàn)。

4.2 搖床常溫搖動(dòng)10-15分鐘至條帶清晰可見(jiàn)。

4.3 加入適量蒸餾水脫色，期間更換1-2次蒸餾水，搖床常溫搖動(dòng)10-15分鐘至背景干凈。

4.4 觀(guān)察保存結果。

5. 實(shí)驗示例：

BN-PAGE 3-12% Precast Gel
穩壓120V 1.5 h 1×BN/CN電泳緩沖液 冰浴電泳

Blue/Clear 非變性凝膠電泳試劑盒(RTD6139/RTD6138)

使用該產(chǎn)品發(fā)表部分文章列表：

1. [2021 IF=10.15] SlRIP1b is a global organellar RNA editing factor, required for normal fruit development in tomato plants

Author: Jinyan Li, Keru Wang, Yongfang Yang, Yao Lu, Kaicheng Cui, Yajing Ji, Liqun Ma, Ke Cheng, Oren Ostersetzer-Biran, Feng Li, Guiqin Qu, Benzhong Zhu, Daqi Fu, Yunbo Luo, Hongliang Zhu

Journal: New Phytologist  2023，Volume237, Issue4，February 2023，Pages 1188-1203

Institution： China Agricultural University

Paper link：https://doi.org/10.1111/nph.18594

2. [2022 IF=8.0] Tektin bundle interacting protein, TEKTIP1, functions to stabilize the tektin bundle and axoneme in mouse sperm flagella

Author: Xin?Yan Geng,Hui?Juan Jin, Lan Xia.Bin?Bin Wang,Su?Ren Chen

Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2024) 81:118 

Institution: Beijing Normal University

Paper link：https://doi.org/10.1007/s00018-023-05081-3