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RealPAGE 3-8% Tris-醋酸預制膠 U型玻璃板

RealPAGE 3-8% Tris-醋酸預制膠 U型玻璃板

產(chǎn)品編號:RTD6154-0308

產(chǎn)品規格:10板/盒

數量
價(jià)格 ¥500

RealPAGE 3-8% Tris-醋酸預制膠

產(chǎn)品組成:

貨號

名稱(chēng)

規格

貯存

RTD6154-0308

RealPAGE 3-8% Tris-醋酸預制膠

10/

4-8

說(shuō)明書(shū)

一份

-

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

Tris-醋酸-SDS-PAGE凝膠電泳適合于分離高分子量蛋白,可以有效分離50-500 kD范圍內蛋白;電泳體系呈中性,抑制半胱氨酸的二次氧化,防止二硫鍵在凝膠中交聯(lián);在變性還原電泳中,電泳緩沖體系中加入抗氧化劑,整個(gè)電泳過(guò)程都在還原條件下進(jìn)行,有效防止二硫鍵的形成。

RealPAGE 3-8% Tris-醋酸預制膠為梯度凝膠,濃度為3-8%,厚度為1.1 mm,12齒,每個(gè)泳道可以上樣最大30 μl樣品。另外,本公司也提供Tris-醋酸-SDS-PAGE電泳試劑盒(貨號:RTD6155)包含預制膠、蛋白上樣、蛋白電泳、染色及轉膜所需的全部試劑。

貯存及運輸:

   按照標簽溫度貯存;試劑盒常溫運輸。

使用說(shuō)明:

1. 實(shí)驗準備:

1.1 20×樣品還原劑為干粉,4℃貯存。用前加入1ml超純水震蕩徹底溶解后使用,已經(jīng)溶解的20×樣品還原劑-20℃貯存。

1.2 400×抗氧化劑為干粉,常溫貯存。用前加入15 ml超純水震蕩徹底溶解后使用,已經(jīng)溶解的400×抗氧化劑-20℃貯存。

2. 電泳:

注:伯樂(lè )Mini IIIMini-PROTEAN Tetra Cell,天能VE-180,六一24K系列電泳槽請確保密封條的安裝方向(如圖)。

六一其他系列,君意東方JY-SCZ2/4,百晶BG-verMINI等電泳槽可以直接使用預制膠。

不兼容Thermol系列電泳槽。

2.2 準備1×電泳緩沖液:

總體積

1000 ml

10×Tris-醋酸-SDS電泳緩沖液

100 ml

超純水

900 ml

2.2.1 外槽緩沖液:取適量體積1×電泳緩沖液用于外槽緩沖液。

2.2.2 內槽緩沖液:對于還原樣品電泳,200 ml 1×電泳緩沖液中加0.5 ml 400×抗氧化劑,混合均勻后用于內槽緩沖液。對于非還原樣品電泳,直接在內槽中加入1×電泳緩沖液,不要添加400×抗氧化劑。

2.3準備上樣樣品:

注:表格以配制10 μl樣品為例,其他體積按照比例調整。

 

總體積10 μl

組份

非還原樣品

還原樣品

蛋白樣品

x μl

x μl

5×MonoClolor蛋白上樣緩沖液 (變性,非還原)

2 μl

2 μl

20×樣品還原劑

-

0.5 μl

超純水

補至10 μl

 

95℃ 10分鐘

2.4電泳過(guò)程;

在電泳槽的內槽內加入1×電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過(guò)加樣孔),輕輕的撥出梳子,用1ml吸頭沖洗加樣孔3次;隨后在電泳槽外槽加入適量的1×電泳緩沖液。上樣,電泳。

恒電壓

起始電流

結束電流

電泳時(shí)間

150V

40-55 mA/板膠

25-40 mA/板膠

60+min

注:冰浴電泳(可選)

3. 染色:

3.1 將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器中,加入適量FastBlue蛋白染色液(以剛剛覆蓋過(guò)膠面為適),搖床常溫搖動(dòng),條帶5-10分鐘即可見(jiàn)(蛋白含量高于1 μg條帶)。

3.2 搖床常溫繼續搖動(dòng)15-30分鐘至條帶清晰可見(jiàn)。

3.3 加入適量蒸餾水脫色,期間更換1-2次蒸餾水,搖床常溫搖動(dòng)10-15分鐘至背景干凈。

3.4 觀(guān)察保存結果。

4. 轉膜:

4.1 轉印膜選擇:

Tris-醋酸凝膠轉膜可以使用NC膜和PVDF膜,需要選擇0.45 μm孔徑。PVDF膜使用前注意需要用甲醇潤濕活化。

4.2 10×Tris-醋酸轉膜緩沖液(溶液型)配制:

將10×Tris-醋酸轉膜緩沖液(濕轉,粉末型)粉末溶解于500 ml超純水中,即配成500 ml 10×Tris-醋酸轉膜緩沖液(溶液型),不要調節pH,pH~7.2。

4.3 準備1×轉膜緩沖液:

 

 

即用型轉膜緩沖液 配制量 1

 

10×Tris-醋酸轉膜緩沖液(溶液型)

100 ml

 

 

變性蛋白

非變性蛋白

20 kD蛋白

無(wú)水甲醇

20%

5-10%

SDS

0.01%

0.01%

20-80 kD蛋白

無(wú)水甲醇

10%

0-5%

SDS

0.05%

0.05%

80 kD蛋白

無(wú)水甲醇

10%NC膜)

0-5%PVDF膜)

0%

SDS

0.1%

0.1%

 

超純水

定容至1升,不要調節pH,pH~7.2


注:甲醇和SDS在轉膜中有拮抗作用。甲醇使蛋白更加結合在膜上,而SDS讓蛋白更加離開(kāi)膜。因此對大蛋白轉膜來(lái)說(shuō),多加SDS,少加甲醇;而對小蛋白轉膜,多加甲醇,少加SDS。

4.4 轉膜條件:

以下轉膜條件僅供參考,客戶(hù)針對自己的目的蛋白,最好經(jīng)過(guò)1-2次預實(shí)驗后,確定最佳的轉膜條件。

膜孔徑

蛋白大小

穩流

建議時(shí)間

降溫措施

0.22 μm

低于20 kD

200 mA

~30分鐘

不需要

0.45 μm

20-50 kD

300 mA

~45分鐘

需要

0.45 μm

50-200 kD

350 mA

~50分鐘

需要

0.45 μm

高于200 kD

350 mA

~2.5-4.5小時(shí)

需要

 

實(shí)驗示例:



 
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