尿素-SDS-PAGE凝膠快速制備及電泳試劑盒

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尿素-SDS-PAGE凝膠快速制備及電泳試劑盒

產(chǎn)品編號：RTD6163

產(chǎn)品規格：50次

數量

價(jià)格￥400

尿素-SDS-PAGE凝膠快速制備及電泳試劑盒

貨號	名稱(chēng)	規格
RTD6163	尿素-SDS-PAGE凝膠快速制備試劑盒	50次

● 產(chǎn)品組成：

貨號	名稱(chēng)	規格	貯存
AC2914-02	40%PAA(29:1)	100 ml	4℃
TS050-01	4×Tris/SDS分離膠緩沖液 pH8.8	100 ml	4℃
TS030-01	4×Tris/SDS濃縮膠緩沖液 pH6.8	50 ml	4℃
RU5080	尿素（電泳級）	220 克	RT
AP020P	APS（干粉）	0.5 g	RT
TA0761-01	TEMED	0.5ml	4℃，避光
PL080-01	5×MonoColor蛋白上樣緩沖液(變性,還原)	1 ml	-20℃
TG120P	5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液(變性電泳,粉末型)	1 L	RT
	說(shuō)明書(shū)	一份

● 貯存、效期及運輸：

按照標簽溫度貯存；有效期一年；常溫運輸。

● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本公司提供的尿素-SDS-PAGE凝膠快速制備試劑盒包含凝膠制備以及蛋白電泳所需的全部試劑。在SDS-PAGE中尿素作為輔助的變性劑，能與SDS一起徹底變性蛋白，特別是一些跨膜多次的蛋白，尿素輔助SDS可以徹底打開(kāi)蛋白的高級結構。該產(chǎn)品可以用于Blue Native電泳分離后的二向電泳，也可以用于一些堿性蛋白如組蛋白，魚(yú)精蛋白的變性電泳分離。

本試劑盒可配制至少50塊常規大?。?×10 cm）1mm厚度的PAGE膠。

● 使用說(shuō)明：

一. 配制分離膠（各試劑使用量請參考表1）

1.1 配制分離膠前，根據以下配方準備10% APS溶液-5 ml：

將0.5 gAPS干粉溶于5 ml滅菌水中，徹底溶解后分裝，1 ml/支，-20℃備存，每次取一管使用。10% APS應盡量減少常溫存放時(shí)間，以防失效。10%APS在4℃有效期為一周，-20℃有效期6個(gè)月。若發(fā)現凝膠聚合時(shí)間延長(cháng)，應考慮更換使用-20℃保存的10%APS。

1.2按照表1將不同體積的成分在小燒杯或試管中混合；加入10%APS和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。

1.3 在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液（對于mini-gel，凝膠液加至約距前玻璃板頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可），然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-5 cm的水層，使凝膠表面保持平整。

1.4 靜置30-60分鐘，待分離膠和水層之間出現一個(gè)清晰的界面后，說(shuō)明凝膠已聚合。

表1 SDS-PAGE分離膠配方表

組份	不同凝膠體積對應各組份的取樣量
6％膠 5 ml 10 ml 15 ml 20 ml
尿素	1.8 g	3.6 g	5.4 g	7.2 g
4×Tris/SDS分離膠buffer pH8.8	1.25 ml	2.5 ml	3.75 ml	5 ml
40％ PAA（29:1）	0.75 ml	1.5 ml	2.25 ml	3 ml
H₂O	定容至5ml	定容至10 ml	定容至15 ml	定容至20 ml
TEMED	0.005 ml	0.01 ml	0.015 ml	0.02 ml
10％ APS	0.05 ml	0.1 ml	0.15 ml	0.2 ml
8％膠 5 ml 10 ml 15 ml 20 ml
尿素	1.8 g	3.6 g	5.4 g	7.2 g
4×Tris/SDS分離膠buffer pH8.8	1.25 ml	2.5 ml	3.75 ml	5 ml
40％ PAA（29:1）	1 ml	2 ml	3 ml	4 ml
H₂O	定容至5ml	定容至10 ml	定容至15 ml	定容至20 ml
TEMED	0.005 ml	0.01 ml	0.015 ml	0.02 ml
10％ APS	0.05 ml	0.1 ml	0.15 ml	0.2 ml
10％膠 5 ml 10 ml 15 ml 20 ml
尿素	1.8 g	3.6 g	5.4 g	7.2 g
4×Tris/SDS分離膠buffer pH8.8	1.25 ml	2.5 ml	3.75 ml	5 ml
40％ PAA（29:1）	1.25 ml	2.5 ml	3.75 ml	5 ml
H₂O	定容至5ml	定容至10 ml	定容至15 ml	定容至20 ml
TEMED	0.005 ml	0.01 ml	0.015 ml	0.02 ml
10％ APS	0.05 ml	0.1 ml	0.15 ml	0.2 ml
12％膠 5 ml 10 ml 15 ml 20 ml
尿素	1.8 g	3.6 g	5.4 g	7.2 g
4×Tris/SDS分離膠buffer pH8.8	1.25 ml	2.5 ml	3.75 ml	5 ml
40％ PAA（29:1）	1.5 ml	3 ml	4.5 ml	6 ml
H₂O	定容至5ml	定容至10 ml	定容至15 ml	定容至20 ml
TEMED	0.005 ml	0.01 ml	0.015 ml	0.02 ml
10％ APS	0.05 ml	0.1 ml	0.15 ml	0.2 ml
15％膠 5 ml 10 ml 15 ml 20 ml
尿素	1.8 g	3.6 g	5.4 g	7.2 g
4×Tris/SDS分離膠buffer pH8.8	1.25 ml	2.5 ml	3.75 ml	5 ml
40％ PAA（29:1）	1.875 ml	3.75 ml	5.625 ml	7.5 ml
H₂O	定容至5ml	定容至10 ml	定容至15 ml	定容至20 ml
TEMED	0.005 ml	0.01 ml	0.015 ml	0.02 ml
10％ APS	0.05 ml	0.1 ml	0.15 ml	0.2 ml

二. 濃縮膠制備：

2.1 去除覆蓋在分離膠上的水層。

2.2 按照表2將不同體積成分在一個(gè)小燒杯或試管中混合；加入10%過(guò)硫酸銨和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。

2.3 將濃縮膠溶液加至分離膠的上面，直至凝膠溶液到達前玻璃板的頂端。

2.4 將梳子插入凝膠內，避免產(chǎn)生氣泡。

2.5 靜置30-60分鐘，等待濃縮膠聚合。

表2 SDS-PAGE濃縮膠(4%)配方表

組份	不同凝膠體積對應各組份的取樣量
組份	2 ml	4 ml	5 ml	10 ml
尿素	0.72 g	1.44 g	1.8 g	3.6 g
4×Tris/SDS濃縮膠buffer pH6.8	0.5 ml	1 ml	1.25 ml	2.5 ml
40％ PAA（29:1）	0.2 ml	0.4 ml	0.5 ml	1 ml
H₂O	定容至2 ml	定容至4 ml	定容至5 ml	定容至10 ml
TEMED	0.002 ml	0.004 ml	0.005 ml	0.01 ml
10％ APS	0.02 ml	0.04 ml	0.05 ml	0.1 ml

三. 電泳：

3.1 5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液的配制-1 L：

將一包5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液干粉全部倒入1L燒杯中，加入約900 ml水徹底溶解，用水定容至1 L，即配成5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液（此溶液不用調節pH值）。用前再稀釋5倍即配成1×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液。

3.2 電泳：

在電泳槽的內槽內加入1×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過(guò)加樣孔)，輕輕的撥出梳子，隨后在電泳槽外槽加入適量的1×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液。上樣，電泳，一般是濃縮膠80V，分離膠120V恒壓，等指示前沿溴酚蘭電泳到分離膠下緣后，結束電泳，染色或者進(jìn)行下一步實(shí)驗。

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