瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒
● 試劑盒內容:
試劑盒組成
|
RTP2201-02 (100次)
|
RTP2201-03(200次)
|
溶膠液PN
|
100 ml
|
2×100 ml
|
3 M NaAc pH5.2
|
500μl
|
500μl
|
漂洗液PW
|
25 ml
|
2×25 ml
|
洗脫緩沖液EB
|
15 ml
|
15 ml
|
吸附柱CA1
|
100個(gè)
|
2×100個(gè)
|
收集管(2 ml)
|
100個(gè)
|
2×100個(gè)
|
說(shuō)明書(shū)
|
1份
|
1份
|
● 儲存條件:
本試劑盒在室溫(15–25℃)干燥條件下,可保存12個(gè)月;更長(cháng)時(shí)間的保存可置于2–8℃。(注意:當低溫貯存時(shí),使用前應先將試劑盒內的溶液在室溫中放置一段時(shí)間,必要時(shí)可在37℃水浴中預熱10-20分鐘,以平衡溶液溫度。)
● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
本試劑盒采用可以高效、專(zhuān)一結合DNA的硅基質(zhì)材料和獨特的緩沖液系統,從TAE或TBE瓊脂糖凝膠上回收DNA片段,同時(shí)去除蛋白質(zhì)、其它有機化合物、無(wú)機鹽離子及寡核苷酸引物等雜質(zhì)??苫厥?00 bp–40 kb大小的片段,回收率大于80%(<100 bp 和>10kb 的DNA片段回收率為30-50 %)。
每個(gè)吸附柱每次最多可吸附的DNA量約為20 μg。
使用本試劑盒回收的DNA可適用于各種常規操作,包括酶切、PCR、測序、文庫篩選、連接和轉化等實(shí)驗。
● 產(chǎn)品特點(diǎn):
1 溶膠液PN為亮黃色,便于觀(guān)察膠是否徹底融化和溶膠體系的pH是否合適。
2 操作快捷,單個(gè)樣品操作少于15分鐘。
注意事項:請務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。
1 電泳時(shí)最好換用新鮮的電泳緩沖液,以免影響電泳和回收效果;如有可能,盡量使用TAE系統,因為有研究指出使用TBE系統后,回收產(chǎn)物中的痕量硼酸會(huì )影響后續的酶切反應。
2 切膠時(shí),紫外照射時(shí)間應盡量短,以免對DNA造成損傷;請盡量去除不含目的片段的瓊脂糖凝膠,這將會(huì )對融膠很有幫助。
3 第一次使用前請按照標簽說(shuō)明在漂洗液PW中加入無(wú)水乙醇,并做好標記,用完后緊擰瓶蓋。
● 操作步驟:
如非指出,所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。
1 將單一的目的DNA條帶從瓊脂糖凝膠中切下(盡量切除多余部分)放入干凈的離心管中,稱(chēng)取重量。
2 向膠塊中加入3倍體積溶膠液PN (如果凝膠重為100mg,其體積可視為100 μl,則加入300 μl溶膠液),55℃水浴放置10分鐘,其間不斷溫和地上下翻轉離心管,以確保膠塊充分溶解。
注意:
① 如果此時(shí)溶膠液變?yōu)榉奂t色,請加入少量3MNaAc pH5.2(一般說(shuō)來(lái),10μl足矣),使溶膠液變?yōu)辄S色再上柱離心。
② 對于高濃度的凝膠(>2%),按照100mg凝膠加入100μl滅菌水和600μl溶膠液PN的比例加入溶膠液PN。
③ 膠塊完全溶解后最好將膠溶液溫度降至室溫再上柱,因為吸附柱在較高溫度時(shí)結合DNA的能力較弱。
3 可選步驟:當目的片段<500bp時(shí),如想提高回收效率,向溶膠體系種加入1/3溶膠液PN體積的異丙醇(如使用300μl溶膠液,則加入100μl異丙醇),混勻,55℃溫浴1分鐘后再進(jìn)行步驟4。當目的片段>500bp時(shí),省略此步驟,直接進(jìn)行步驟4。
4 將上一步所得溶液加入到吸附柱CA1中(吸附柱放入收集管中),室溫放置2分鐘,13,000 rpm離心60秒,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放入收集管中。
注意:
1 吸附柱CA的有效容積為700μl,如溶膠體系體積大于700μl,分次上柱,保證全部溶液都加到吸附柱中。
2 <100bp和>10kb的片段請在室溫放置10分鐘,這將會(huì )提高回收效率。
5 向吸附柱中加入700μl漂洗液PW(使用前請先檢查是否已加入無(wú)水乙醇),13,000 rpm離心60秒,倒掉廢液,將吸附柱重新放入收集管中。
6 向吸附柱中加入500μl漂洗液PW,13,000 rpm離心30-60秒,倒掉廢液。
7 將離心吸附柱CA1放回收集管中,13,000 rpm離心2分鐘,盡量除去漂洗液。
注意:此步必不可少!如果漂洗液有殘留會(huì )影響回收效率和DNA質(zhì)量,進(jìn)而影響下游實(shí)驗;離心后將吸附柱蓋子打開(kāi),室溫放置2分鐘,這樣將有助于徹底揮發(fā)殘余乙醇。
8 將吸附柱放到一個(gè)干凈離心管中,向吸附膜中間位置懸空滴加適量洗脫緩沖液EB(一般不要少于30μl),室溫放置2分鐘。13,000 rpm離心1分鐘收集DNA溶液。
注意:
1可將洗脫緩沖液EB預熱到70℃后再加到吸附膜上,這樣可以提高洗脫效率。
2 CA1柱的洗脫體積不應少于30 μl,體積過(guò)小將會(huì )降低回收效率。
3洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5范圍內,pH值低于7.0會(huì )降低洗脫效率
9 DNA產(chǎn)物-20℃保存。
RTP2201 瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒發(fā)表文章
1. [2008 IF=1.749] Development of a sequence-characterized
ampli?ed region marker for diagnosis of dwarf bunt of wheat and detection of
Tilletia controversa Kuhn.
Author: J.H. Liu, L. Gao, T.G. Liu and W.Q. Chen
Product: RTP2201 瓊脂糖凝膠回收試劑盒
Journal: Letters in Applied Microbiology 2009,49,235-240
Institution:Institute of
Plant Protection ,Chinese Academy of Agricultural Sciences
Paper link: https://doi.org/10.1111/j.1472-765X.2009.02645.x
2. [2009 IF=2.435] Characterization of three new S-alleles
and development of an S-allele-specific PCR system for rapidly identifying the S-genotype
in apple cultivars.
Author: Shenshan Long, Maofu Li, Zhenhai Han, Kun Wang, Tianzhong Li
Product: RTP2201瓊脂糖凝膠回收試劑盒
Journal: Tree Genetics & Genomes (2010)
6:161–168
Institution:China
Agricultural University
Paper link: https://link.springer.com/article/10.1007/s11295-009-0237-6
3. [2010 IF=0.921] An ISSR-based Approach for the Molecular
Detection and Diagnosis of Dwarf Bunt of Wheat, Caused by Tilletia controversa
Kuhn.
Author: Li Gao,Wanquan Chen and Taiguo Liu
Product: RTP2201 瓊脂糖凝膠回收試劑盒
Journal: J Phytopathol 159:155–158 (2011)
Institution:State Key
Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests, Institute of Plant
Protection, CAAS
Paper link:https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1439-0434.2010.01735.x
4. [2010 IF=1.359] Curing the Plasmid pXO2 from Bacillus
anthracis A16 Using Plasmid Incompatibility.
Author: Huagui Wang, Xiankai Liu, Erling Feng, Li Zhu, Dongshu Wang, Xiangru Liao,
Hengliang Wang
Product: RTP2201 瓊脂糖凝膠回收試劑盒
Journal: Curr Microbiol (2011) 62:703–709
Institution:State Key
Laboratory of Pathogen and Biosecurity, Beijing Institute of Biotechnology
Paper link:https://link.springer.com/article/10.1007/s00284-010-9767-2
5. [2010 IF=1.993] Computation-assisted SiteFinding-PCR for
isolating flanking sequence tags in rice
Author: Hongru Wang, Jun Fang, Chengzheng Liang, Minghui He, Qiye Li, and
Chengcai Chu
Product: RTP2201 瓊脂糖凝膠回收試劑盒
Journal: BioTechniques Vol. 51 | No. 6 | 2011
Institution:Institute of
Genetics and Developmental Biology, Chinese Academy of Sciences
Paper link:https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22150334/
6. [2013 IF=1.687] Tobacco Arabinogalactan Protein NtEPc Can
Promote Banana (Musa AAA) Somatic Embryogenesis.
Author: H. Shu & L. Xu & Z. Li & J. Li & Z. Jin & S. Chang
Product: RTP2201 瓊脂糖凝膠回收試劑盒
Journal: Appl Biochem Biotechnol (2014)
174:2818–2826
Institution:Haikou
Experimental Station, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences
Paper link:https://link.springer.com/article/10.1007/s12010-014-1228-0
7. [2020 IF=1.857] Characterization and Developmental
Expression Patterns of Four Hexamerin Genes in the Bumble Bee, Bombus
terrestris (Hymenoptera: Apidae).
Author: Yakai Tian, Yingping Qu,Kun Dong,Shaoyu He,Wu Jie, and Jiaxing Huang
Product: RTP2201 瓊脂糖凝膠回收試劑盒
Journal: Journal of Insect Science (2021) 21(5): 13; 1–8
Institution:Institute of
Apicultural Research, Chinese Academy of Agricultural Sciences
Paper link:https://doi.org/10.1093/jisesa/ieab078
8. [2022 IF= 1.7] VvAGAMOUS Affect Development of Four
Different Grape Species Ovary.
Author: Pengfei Zhang, Yuqin Zhang1, Qifeng Zhao, Tiequan Niu, Pengfei Wen and
Jinjun Liang
Product: RTP2201 瓊脂糖凝膠回收試劑盒
Journal: Phyton-International Journal of
Experimental Botany (2023) , vol.92, no.4
Institution:College of
Horticulture, Shanxi Agricultural University
Paper link:https://doi.org/10.32604/phyton.2023.026227